除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解，不需高壓滅菌外，大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘。尤其是對無菌試驗培養(yǎng)基滅菌不徹底，直接關(guān)系到試驗結(jié)果。因此必須認真對高壓滅菌器進行滅菌效果的驗證。 
1．試驗材料
(1) 嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillus  stearothermophilus) ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-l05CFU/片。
(2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學指示卡。
(3) 溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓滅菌20分鐘后備用。
(4) 0-150℃留點溫度計。
2．方法與結(jié)果
將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中?；瘜W指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層，則需放10處。
留點溫度計標化合格后方可用于驗證試驗。檢測前，需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測后留點溫度計的溫差應(yīng)存1℃之間，則說明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的。
滅菌后的菌片應(yīng)在嚴格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時，觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細菌仍可在培養(yǎng)基中生長，分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色，則說明芽胞已滅活。同時要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照，不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照。
化學指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時，由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺，并與對照色相比，可判斷滅菌效果是否達到要求?；瘜W指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會變色，影響滅菌效果的觀測。
高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進入滅菌器內(nèi)，與滅菌物品接觸，并將原有的冷空氣排出方可達到滅菌的效果。要進行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3)。二種驗證各重復(fù)三次，共做六次。
5個點六次試驗表明溫度均在121℃，化學指示卡變黑；程度與對照色一致；培養(yǎng)基均未改變顏色，說明高壓蒸氣滅菌效果合格。
高壓滅菌器屬于強檢儀器，但強檢只是對儀器物理參數(shù)的考核。所以做過強檢的滅菌器還必須進行滅菌效果的驗證。一些單位常常忽略了這個重要的問題。國內(nèi)市售的手提滅菌器，往往儀器指針達到所需的溫度，但滅菌物品的實際溫度卻未達到要求。導(dǎo)致滅菌物品不徹底，影響實驗結(jié)果。培養(yǎng)基滅菌不徹底，影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣滅菌器無菌效果的驗證是一個必須引起重視的問題。